Dounce玻璃勻漿器是一種常用于實驗室和生產現場的設備，主要用于混合和攪拌粉末狀或液體狀的物質，以獲得均勻的混合效果。通常由高硼硅玻璃制成，具有耐腐蝕、耐高溫、抗磨損等優良性能。它由一個外表面為磨砂的球狀或橢圓杵和一個內表面為磨砂的玻璃管組成，通過手動推拉旋轉杵而壓碎和磨碎組織。

　　玻璃勻漿器的工作原理基于高速旋轉的轉子產生的離心力。當轉子在高速旋轉時，會產生離心力，使液體或粉末在玻璃杯中形成一個漩渦。在這個漩渦中，兩種或多種液體、粉末與溶劑、固體顆粒與溶劑被迫混合在一起，從而形成一個均勻的溶液、混合物或懸浮液。

　　Dounce玻璃勻漿器其操作步驟需嚴格遵循低溫、規范操作原則，以確保樣品活性和實驗結果準確性。以下是詳細操作流程：

　　1、操作前準備

　　樣品預處理

　　組織切割：用組織剪或手術刀迅速將清洗后的組織分離成1cm³左右的小塊，隨后在冰冷的勻漿緩沖液中進一步切碎，傾出血水，并用緩沖液反復漂洗，直至組織碎成1mm³大小且無可見血z，置于冰上備用。

　　緩沖液配制與預冷：根據實驗需求配制勻漿緩沖液，并提前預冷至0~4℃，整個操作過程需在低溫環境下進行，以抑制蛋白酶活性，保護樣品活性。

　　儀器檢查與組裝

　　設備檢查：確認Dounce勻漿器（含勻漿杯、A杵）無破損、裂紋，杵與勻漿杯的間隙符合實驗要求。

　　環境準備：將勻漿器固定在冰浴裝置中，確保操作全程樣品和儀器處于低溫狀態。

　　2、勻漿操作

　　樣品裝載：將預處理后的組織碎塊轉移至預冷的Dounce勻漿器中，按組織體積加入5倍體積的冰冷勻漿緩沖液，確保樣品與緩沖液充分混合。

　　手動勻漿：手持A杵，垂直插入勻漿杯，緩慢上下抽動進行研磨，保持動作平穩，避免產生氣泡。勻漿次數控制在10~20次，具體次數可根據組織類型調整，例如腦組織、培養細胞等較脆弱樣品，通常10~20次即可達到理想勻漿效果。

　　3、勻漿后處理

　　離心分離

　　s次離心：將勻漿液在4℃條件下，以600g離心10分鐘，此時上清液含細胞膜、線粒體和細胞溶膠，沉淀為未破碎的細胞及細胞核，棄去沉淀，保留上清。

　　二次離心：上清液在4℃下，以8000g離心10分鐘，沉淀線粒體，棄沉淀，收集上清。

　　三次離心：上清液用角轉頭離心，在4℃條件下，以100000g離心20分鐘，棄上清，保留沉淀。

　　沉淀重懸與再離心

　　重懸操作：用勻漿緩沖液重懸上述沉淀，轉移至小號Dounce勻漿器中，輕柔勻漿，使沉淀充分分散。

　　再次離心：將重懸后的液體在4℃條件下，再次以100000g離心20分鐘，棄去上清，保留目標沉淀。

　　樣品收集

　　最終重懸：用小體積的適宜緩沖液徹d重懸沉淀，確保沉淀完q溶解，得到純化后的樣品。

　　蛋白測定與保存：取一小份等分試樣進行蛋白量測定，剩余樣品可置于干冰/乙醇浴中速凍，保存于-85℃備用。